菌酶協同對犢牛生長性能、糞便微生物的研究表明可提高生長、乳酸菌數量和預防腹瀉

2022-04-14 14:26:24 點擊：

摘要：試驗旨在研究菌酶協同對荷斯坦犢牛生長性能、糞便微生物和養分含量的影響。選擇1月齡荷斯坦犢牛40頭，按照隨機分配原則分為對照組（基礎TMR日糧）、微生物組（基礎TMR日糧+復方微生態制劑）、酶組（基礎TMR日糧+復方酶制劑）和微生物+酶組（基礎TMR日糧+復方微生態制劑+復方酶制劑），每個處理10頭犢牛，進行30 d的飼養試驗。結果表明：①微生物+酶組的試驗末重和平均日增重顯著高于酶組、微生物組和對照組（P＜0.05），而料重比顯著低于酶組、微生物組和對照組（P＜0.05）。②與對照組相比，微生物組、酶組和微生物+酶組的好氧菌和大腸桿菌總數均顯著降低（P＜0.05），而厭氧乳酸菌數顯著升高（P＜0.05）；微生物組的大腸桿菌總數和厭氧乳酸菌數又顯著低于微生物+酶組和酶組（P＜0.05）。③微生物+酶組鮮糞的粗蛋白（CP）、干糞的有機物（OM）、CP和碳水化合物（TCHO）含量均顯著低于對照組（P＜0.05）。綜上所述，菌酶協同作用可以降低奶犢牛的料重比，從而提高犢牛生長性能，且菌酶協同優于單獨使用微生物制劑或酶制劑。

犢牛的營養供給不僅直接影響現階段的生長發育，還會間接影響其成年后的繁殖性能和產奶性能。犢牛斷奶后隨著固體飼料進食量的增加，消化器官快速發育，胃腸道容積和表面積增加，各種消化酶分泌量增加，胃腸道微生物菌群數量增加、種類趨于穩定。以上變化必將影響犢牛對食入飼糧各養分的消化能力。微生物飼料添加劑是采用農業農村部認可的有益微生物經發酵制成的人工培養菌群及其代謝產物，飼喂消化道發育尚不完善的犢牛，可激發犢牛自身有益菌種繁殖增長，有效抵制有害菌系的生長，提高犢牛機體免疫力和飼料利用率，預防和治療一些消化道疾病，有效減少有害氣體排放。飼料酶制劑通過補充犢牛內源消化酶的不足，有效降解飼糧中的抗營養因子，從而達到調節穩定犢牛腸道微生物菌群、提高犢牛免疫力和飼料營養價值等功效。菌酶協同發酵飼料的效果往往會優于單獨使用微生態制劑或酶制劑。但復方微生態制劑（酵母菌和枯草芽孢桿菌）和復方酶制劑（木聚糖酶、纖維素酶和葡聚糖酶）協同對荷斯坦犢牛的生長性能、糞便微生物和養分含量的影響尚未見報道。本研究選擇斷奶后荷斯坦犢牛為研究對象，探討單一的復方微生態制劑/復方酶制劑或者菌酶協同對荷斯坦犢牛生長性能、糞便微生物和養分含量的影響，以期為犢牛實際生產提供理論依據。

1、材料與方法

1.1 試驗材料

牛羊養殖專用復合益生菌

【產品成分分析保證值】枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、乳酸菌（糞腸球菌、屎腸球菌）、丁酸梭菌、植物乳桿菌等，每克≥200億cfu/g。水分＜9.0%

凈含量：1000g

1.2 試驗動物

選擇1月齡荷斯坦犢牛40頭，隨機分成4個處理，每個處理10頭。對照組飼喂基礎TMR日糧（見表1）；微生物組在基礎TMR日糧中添加微生態制劑（250 g/kg）；酶組在基礎TMR日糧中添加酶制劑（250 g/kg）；微生物+酶組在基礎TMR日糧中同時添加微生態制劑（250 g/kg）和酶制劑（250 g/kg）。進行30 d的飼養試驗。

注：1.預混料為每千克日糧提供：Ca 1.8 g、P 1.6 g、VA 2 200 IU、VD 300 IU、VE 25 IU、Fe 50 mg、Co 0.1 mg、Cu 10 mg、Zn 40 mg、I 0.25 mg、Se 0.3 mg；

2、營養水平中凈能為計算值，其余為實測值。

1.3 測定指標

生長性能：每天記錄采食量，試驗開始和結束時對試驗牛進行稱重，計算料重比。

糞便營養成分：干物質（DM）、粗灰分（CA）、有機物（OM）、粗蛋白（CP）、粗脂肪（EE）含量和總能（GE）的測定參考AOAC（2012）和國標的方法進行。DM含量采用（103±2）℃烘干法（GB/T 6435—2006）測定，CP含量采用半微量凱氏定氮法（GB/T 6432—1994）測定，EE含量采用索氏乙醚提取法（GB/T 6433—2006）測定，OM含量采用550℃灰化法（GB/T 6438—2007）測定。碳水化合物（TCHO）和GE按照以下公式計算。

OM（%）=DM（%）-CA（%）

TCHO（%）=DM（%）-CP（%）-EE（%）

GE(MJ/kg)=（5.6×CP+4.2×TCHO+9.4×EE）×4.18/1000

糞便微生物：在試驗結束當天的晨飼前直腸取糞樣，放入已滅菌的4 mL離心管中，并將裝有樣品的離心管放入裝有冰袋的泡沫箱中保存（離心管不能直接接觸冰袋，應在離心管和冰袋之間加一個紙擋板），用于測定微生物群落。采用細菌培養基培養法測定好氧菌、大腸桿菌、厭氧乳酸菌和沙門氏菌的數量。

按常規方法配制好氧菌培養基、大腸桿菌培養基（麥康凱瓊脂培養基）、乳酸菌培養基（MRS瓊脂培養基）和沙門氏菌培養基（HE瓊脂培養基）。將各培養基121℃滅菌15 min，倒入直徑90 mm的培養皿中，好氧菌培養基厚度4 mm，厭氧菌培養基與皿口相平。細菌數量通過平板菌落計數法用肉眼觀察菌落個數。

平板菌落計數法：

①滅菌：培養皿和槍頭放入高壓蒸汽鍋中滅菌。

②編號：取無菌培養基若干，分別用標簽紙標記培養皿10-4、10-5、10-6、10-7、10-8和10-9各3份。

③稀釋：取1.0 g糞樣加入9 mL生理鹽水,充分振蕩使糞樣在無菌生理鹽水中分布均勻，取混懸液做系列稀釋，依次稀釋。

④取樣，分別用移液槍吸取10-4、10- 5、10-6、10-7、10-8和10-9稀釋液各0.2 mL，加入相應的培養皿中間。

⑤倒平板：分別向盛有不同稀釋度菌液的培養基中倒入冷卻至45℃左右的選擇培養基，搖勻，37℃培養48 h。

⑥計數：計算同一稀釋度3個平板中的菌落平均數，根據稀釋倍數計算出每克糞便中所含的菌數（用對數lg CFU/g表示）。

1.4 數據統計與方法

試驗數據處理采用SAS 9.4軟件進行統計，各處理組間差異采用單因子方差（one-way ANOVA）分析，用TuKey多組極差檢驗法進行多重比較，顯著性水平P＜0.05。

2、結果與分析

2.1 菌酶協同對犢牛生長性能的影響（見表2）

生長性能方差分析表明，微生物+酶組的試驗末重和平均日增重顯著高于酶組、微生物組和對照組（P＜0.05），而料重比顯著低于酶組、微生物組和對照組（P＜0.05）。酶組和微生物組的試驗末重和平均日增重顯著高于對照組（P＜0.05），而料重比顯著低于對照組（P＜0.05）。酶組的料重比顯著低于微生物組（P＜0.05），其他均差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 菌酶協同對犢牛糞便微生物的影響（見表3）

2.3 菌酶協同對犢牛糞便鮮樣基礎上養分含量的影響（見表4）

方差分析表明，微生物+酶組和酶組鮮糞的CP含量顯著低于對照組（P＜0.05），其他均差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 菌酶協同對犢牛糞便DM基礎上養分含量的影響（見表5）

方差分析表明，微生物+酶組的OM、CP含量和TCHO含量顯著低于對照組（P＜0.05）。微生物組、酶組的TCHO含量顯著低于對照組（P＜0.05），其他均差異不顯著（P＞0.05）。

3、討論

3.1 菌酶協同對犢牛生長性能的影響

犢牛的平均日增重、平均日采食量和料重比是反映犢牛生長性能最直觀的指標。犢牛等幼齡反芻動物的消化系統不完善，消化道所分泌的消化酶的數量遠遠不能滿足需要，犢牛主要依賴皺胃和小腸來消化牛奶和日糧，其消化特征與單胃動物類似。30日齡左右的西雜母犢牛日糧中添加復合酶制劑（纖維酶、木聚糖酶、果膠酶、葡萄糖和淀粉酶）顯著提高日增重。復合酶制劑（木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露糖酶、纖維素酶、果膠酶和中性蛋白酶）對70日齡左右的斷奶西門塔爾公犢牛的平均日采食量沒有顯著影響，但200 g/t添加量組的平均日增重顯著高于對照組，可能是酶制劑提高了日糧中的非淀粉多糖的分解，促進了犢牛對日糧的消化和吸收，從而使犢牛的日增重上升。犢牛胃腸道內微生物種類和數量遠遠低于成年牛，不能依賴胃腸道內的微生物來消化食糜。地衣芽孢桿菌顯著提高新生荷斯坦犢牛的平均日增重，但對平均日采食量均無顯著影響。但是復合菌（植物乳桿菌和枯草芽孢桿菌）及益生元（植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌和低聚果糖）均沒有顯著改善3日齡荷斯坦母犢牛的平均日采食量和平均日增重。微生態和酶制劑聯合添加對犢牛生長性能的研究較少。研究表明，1 kg/t復合酶和20 g/t乳酸菌制劑制作的青貯鮮食玉米秸稈顯著提高11月齡海南黑牛的試驗末重和平均日增重。研究證實，微生態制劑和纖維素復合酶制劑顯著改善250 kg左右西門塔爾架子牛的生長性能。本試驗中，微生態制劑（酵母菌和枯草芽孢桿菌）和復方酶制劑（木聚糖酶、纖維素酶、葡聚糖酶）聯合使用顯著提高犢牛的平均日增重和試驗末重，而料重比則顯著降低，表明菌酶協同效果顯著優于單獨使用酶制劑或微生物添加劑，顯著提高犢牛的生長性能。

3.2 菌酶協同對犢牛糞便微生物含量的影響

犢牛糞便中的大腸桿菌、厭氧乳酸菌、好氧菌和沙門氏菌含量是反映犢牛腸道健康狀況的重要指標。有研究表明，當腸道內大腸桿菌數量超過乳桿菌的2～5倍時，就會出現犢牛消化功能障礙或抵抗力下降的情況，進而引發疾病。尚未見菌酶協同影響犢牛糞便微生物含量的文獻報道。0.2%復合酶制劑（β-葡聚糖酶、木聚糖酶和纖維素酶）的早秈稻型飼糧顯著降低體重約35 kg的“長加”二元雜交豬糞便中的大腸桿菌數量。研究表明，酵母菌（布拉氏酵母菌）降低新生荷斯坦犢牛糞便中大腸桿菌的數量，提高乳酸菌數量。給30日齡左右的海福特牛和日本黑牛雜交一代犢牛的基礎飼糧中添加丁酸梭菌（4 g/d和8 g/d），糞便中丁酸梭菌數量分別提高了5.3倍和7.4倍，大腸桿菌較對照組顯著降低，8 g/d組沙門氏菌數量顯著低于對照組。研究發現，菌酶協同[1 g/kg植物乳桿菌+1 g/kg復合酶（β-葡聚糖酶、β-木聚糖酶、β-甘露糖酶和蛋白酶）]使斷奶仔豬糞便中乳酸菌數量和乳酸菌/大腸桿菌比值有增加趨勢，大腸桿菌數量有降低趨勢。復合酵母培養物（5 g/kg）和菌酶協同（5 g/kg復合酵母培養物+0.3 g/kg木瓜蛋白酶）處理的斷奶仔豬糞便乳酸菌數量和乳酸菌/大腸桿菌值顯著高于對照組，大腸桿菌數量顯著低于對照組。本試驗中，微生態制劑（酵母菌和枯草芽孢桿菌）組犢牛糞便中的大腸桿菌最低，菌（酵母菌和枯草芽孢桿菌）酶（木聚糖酶、纖維素酶、葡聚糖酶）協同作用對好氧菌和厭氧乳酸菌的效果最明顯。綜上所述，菌酶協同降低犢牛糞便好氧菌和大腸桿菌總數，提高厭氧乳酸菌數量，對于犢牛腹瀉具有一定的預防作用。

3.3 菌酶協同對犢牛糞便養分含量的影響

牛糞中各養分的含量受日糧組成、營養水平、牛品種、牛本身對飼料的消化情況、飼料品質以及飼料的加工程度等多因素的影響。研究表明，復合酶（淀粉酶和胃蛋白酶）顯著提高35～60日齡犢牛對OM、淀粉和CP的表觀消化率。地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和米曲菌的復合酶制劑（3 g/kg）顯著提高4～6月齡荷斯坦犢牛對顆粒TMR日糧的CP、酸性洗滌纖維的表觀消化率。微生態和酶制劑聯合添加對犢牛表觀消化率的研究較少。菌酶協同（0.25%復合酶制劑+0.25%芽孢桿菌類微生態制劑）顯著提高斷奶仔豬能量、CP和粗纖維的表觀消化率。本試驗中，菌酶協同作用顯著降低鮮糞中CP和干糞的OM、CP、TCHO含量，說明菌酶協同能夠促進奶犢牛對飼料OM、CP和TCHO的吸收和利用。但是菌酶協同對犢牛養分消化率的影響需要代謝試驗進一步證實。

4、結論

本試驗條件下，菌酶協同作用可以降低奶犢牛的料重比，降低犢牛鮮糞的CP含量和干糞的OM、CP和TCHO含量，從而提高犢牛生長性能，且對于糞便微生物的影響優于單獨使用微生物制劑或酶制劑。

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