３.１　飼糧中添加ＹＣ對舍飼牦牛瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響　　

瘤胃ｐＨ是瘤胃生理狀況的最直接表現(xiàn)，與飼糧組成和營養(yǎng)成分密切相關，可綜合反映瘤胃微生物代謝和有機酸產(chǎn)生、吸收、排除及中和的狀況。Ｙｏｏｎ等研究表明，反芻動物瘤胃ｐＨ為６.２～６.８時，瘤胃中發(fā)酵纖維物質(zhì)的微生物活性最高，ｐＨ為５.５～６.０時，瘤胃中發(fā)酵淀粉的微生物活性最強，當瘤胃ｐＨ降低到５.５以下時，動物容易出現(xiàn)酸中毒。本試驗中，各組ｐＨ均處于正常生理范圍內(nèi)，隨著ＹＣ添加水平的升高呈線性降低的趨勢，與Ｅｒａｓｍｕｓ等在奶牛中的研究結果一致，可能是由于ＹＣ促進了飼糧中營養(yǎng)物質(zhì)的快速降解，加速有機酸的積累，導致瘤胃ｐＨ下降。　　

ＮＨ３⁃Ｎ的含量可直接反映瘤胃中微生物生長狀況，也是ＭＣＰ合成主要原料。研究表明最適宜瘤胃微生物生長的ＮＨ３⁃Ｎ含量為１０～５０ｍｇ／ｄＬ。本試驗中，隨著ＹＣ添加水平的升高，ＮＨ３⁃Ｎ含量逐漸降低，與Ｅｒａｓｍｕｓ等的結果一致，在奶牛飼糧中添加ＹＣ能降低瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量。而Ｈｒｉｓｔｏｖ等在奶牛中的研究發(fā)現(xiàn)，ＹＣ對瘤胃含量無顯著影響，Ｌｉｕ等在綿羊的飼糧中添加ＹＣ能夠增加瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量。不同的結果可能與動物品種、飼糧組成、ＹＣ的來源、添加形式等有關。瘤胃內(nèi)ＮＨ３⁃Ｎ和ＭＣＰ的含量密切相關，ＭＣＰ的含量可以反映微生物攝取和利用ＮＨ３⁃Ｎ的能力。本試驗中，隨著ＹＣ添加水平的升高，ＭＣＰ的含量線性升高，與Ｄｉａｓ等的研究結果一致，在泌乳奶牛飼糧中添加ＹＣ降低了瘤胃ＮＨ３⁃Ｎ含量，增加了ＭＣＰ的合成。Ｙｏｏｎ等研究表明，ＹＣ能提高瘤胃微生物的活性和生長繁殖，刺激蛋白分解菌的生長，加快ＮＨ３⁃Ｎ的生成和ＭＣＰ的合成。

ＶＦＡ是瘤胃內(nèi)碳水化合物發(fā)酵的主要產(chǎn)物，是反芻動物主要的能量來源，包括乙酸、丙酸、丁酸及少數(shù)短鏈脂肪酸和支鏈脂肪酸。乙酸、丙酸和丁酸含量較高，其含量約占ＴＶＦＡ的９５％左右，其中丙酸的轉(zhuǎn)化效率最高，乙酸最低。丙酸在糖異生作用下合成葡萄糖，乙酸是乳脂合成的主要前體，在動物生產(chǎn)中丙酸比例越高，可為機體提供的能量越高。研究表明，在反芻動物飼糧中添加ＹＣ可增加ＶＦＡ的含量，也有研究表明，瘤胃中ＶＦＡ的含量與ＹＣ的添加水平無顯著關系。本試驗中，隨著ＹＣ添加水平的升高，瘤胃內(nèi)乙酸比例和乙酸／丙酸顯著降低，丙酸比例顯著增加。與Ｈａｒｒｉｓｏｎ等在泌乳奶牛飼糧中添加ＹＣ增加瘤胃丙酸比例和降低乙酸比例的結果一致。這說明在舍飼牦牛飼糧中添加ＹＣ可以使牦牛瘤胃發(fā)酵類型由乙酸型向丙酸型轉(zhuǎn)變，在采食量相同的情況下，促進舍飼牦牛的增重。

３.２　飼糧中添加ＹＣ對舍飼牦牛瘤胃微生物區(qū)系的影響　　

１６Ｓ ｒＲＮＡ高通量測序技術可以很好地揭示反芻動物瘤胃微生物多樣性。本試驗中，２０個樣品通過Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ平臺測序后共獲得９１７７７０條優(yōu)化序列，平均長度為４４０ｂｐ，共聚類得到１４６３個ＯＴＵ。略高于楊琦玥等在牦牛中的研究結果。Ｍａｏ等研究發(fā)現(xiàn)，覆蓋度高于９７％說明測序樣品取樣充分。本試驗中各組覆蓋度均高于０.９９，說明本次測序結果能真實地反映舍飼牦牛瘤胃細菌群落種類和結構多樣性。Ｓｈａｎｎｏｎ指數(shù)和Ｓｉｍｐｓｏｎ指數(shù)可反映瘤胃菌群的多樣性，Ｓｈａｎｎｏｎ指數(shù)越大，群落多樣性越高；Ｓｉｍｐｓｏｎ指數(shù)越小，群落多樣性越高。Ａｃｅ指數(shù)和Ｃｈａｏ指數(shù)可反映瘤胃菌群的豐富度，其數(shù)值越大，群落豐富度越高。本試驗中，在舍飼牦牛中添加ＹＣ不會影響瘤胃細菌多樣性，但會增加瘤胃細菌的豐富度。　

研究表明，擬桿菌門和厚壁菌門是反芻動物瘤胃中的優(yōu)勢菌門。牦牛瘤胃中的優(yōu)勢菌門為擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門和螺旋菌門，本試驗中，舍飼牦牛瘤胃優(yōu)勢菌門為擬桿菌門、厚壁菌門和變形菌門，與前人研究基本一致。Ｅｖａｎｓ等研究發(fā)現(xiàn)，擬桿菌門在非纖維物質(zhì)的降解中發(fā)揮重要作用，而厚壁菌門主要參與纖維物質(zhì)的分解。非纖維物質(zhì)經(jīng)瘤胃發(fā)酵后產(chǎn)生丙酸，而纖維物質(zhì)被降解后主要產(chǎn)生乙酸。本試驗中，隨著ＹＣ添加水平的升高，擬桿菌門相對豐度逐漸增加，厚壁菌門的相對豐度逐漸降低，但差異不顯著，同時，丙酸比例線性升高，乙酸比例線性降低。這可能與本試驗在舍飼條件下進行，牦牛采食了大量的精料，使得分解淀粉、可溶性碳水化合物的擬桿菌門的相對豐度升高有關。這說明ＹＣ可促進擬桿菌門微生物的生長、增殖，降解飼糧中非纖維類物質(zhì)產(chǎn)生更多的丙酸。螺旋菌門能夠降解纖維素、半纖維素、果膠等，對植物類纖維物質(zhì)轉(zhuǎn)化為ＶＦＡ產(chǎn)生重要影響。本試驗中，螺旋菌門的相對豐度先升高后降低，呈二次曲線變化。這表明在牦牛飼糧中添加１％的ＹＣ可促進瘤胃微生物對纖維類物質(zhì)的降解，同時與纖維降解密切相關的纖維桿菌門也呈現(xiàn)相似的變化趨勢，其在Ⅲ組（１％）纖維桿菌門相對豐度最高。這說明ＶＦＡ含量與組成的變化可能與不同微生物對纖維物質(zhì)和非纖維物質(zhì)降解程度有關。疣微菌門在哺乳動物胃腸道免疫耐受中起主要作用，其物種豐度的減少或缺失與宿主免疫力的下降密切相關。本研究中，隨著ＹＣ添加水平的升高，疣微菌門的相對豐度線性升高。這表明在飼糧中添加ＹＣ可能與增強機體免疫力相關。　

張紅濤研究荷斯坦后備牛瘤胃微生物組成時發(fā)現(xiàn)，普雷沃氏菌屬和琥珀酸菌屬是瘤胃細菌區(qū)系的優(yōu)勢菌屬。高雨飛通過測序發(fā)現(xiàn)錦江牛瘤胃細菌多樣性發(fā)現(xiàn)在屬水平普雷沃氏菌屬、帕拉普氏菌屬、理研菌屬是優(yōu)勢菌屬。本試驗中，舍飼牦牛瘤胃中優(yōu)勢菌屬為普雷沃氏菌屬１、擬桿菌目ＢＳ１１和理研菌科ＲＣ９，與前人研究結果不完全一致，推測可能由動物品種、年齡、飼糧結構、飼養(yǎng)管理等不同引起的。普雷沃氏菌屬是瘤胃中數(shù)量最多的一類擬桿菌門菌屬，參與多種微生物代謝、具有較高活性的半纖維素降解能力和適應不同飼糧結構的能力，在粗蛋白質(zhì)、淀粉、木聚糖和果膠的降解過程中發(fā)揮重要作用。本試驗中，普雷沃氏菌屬１的相對豐度最高，與前人研究結果一致，且各組間差異不顯著。這可能是本研究飼糧粗蛋白質(zhì)和能量水平相近，沒有對普雷沃氏菌屬的相對豐度產(chǎn)生顯著影響。瘤胃球菌屬包括黃色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌，是瘤胃中主要的纖維降解菌，能產(chǎn)生大量的纖維素酶、半纖維素酶和木聚糖酶，降解粗飼料中的纖維素和半纖維素。本研究中，瘤胃球菌屬２的相對豐度呈二次曲線變化，表明在舍飼牦牛飼糧中添加ＹＣ可以促進瘤胃球菌的生長、增殖，提高飼糧中纖維的降解率。瘤胃菌科是厚壁菌門中一種革蘭氏陰性菌，可降解纖維物質(zhì)產(chǎn)生乙酸。本試驗中，瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１１、瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃００１和瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１４的相對豐度隨ＹＣ添加水平的升高而線性降低，使得乙酸比例呈線性降低，推測可能與ＹＣ促進非纖維降解菌的生長、增殖和飼養(yǎng)管理方式有關。同時，本試驗還發(fā)現(xiàn)瘤胃球菌科ＮＫ４Ａ２１４的相對豐度與乙酸比例呈顯著正相關，且瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃００１和瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１４的相對豐度與瘤胃液ｐＨ呈顯著正相關，ＮＨ３⁃Ｎ含量與瘤胃球菌科ＵＣＧ⁃０１１的相對豐度呈顯著正相關。這說明疣微菌科不同屬的代謝能力不同，其中ＮＫ４Ａ２１４＿ｇｒｏｕｐ、ＵＣＧ⁃００１和ＵＣＧ⁃０１４菌屬可能參與ＶＦＡ代謝，而ＵＣＧ⁃０１１屬的相對豐度可能與ＮＨ３⁃Ｎ含量的產(chǎn)生密切相關。克里斯滕森菌科屬于厚壁菌門，在維持胃腸道結構和功能和動物機體免疫調(diào)節(jié)方面發(fā)揮重要作用。本試驗中，克里斯滕森菌科Ｒ７的相對豐度隨著ＹＣ添加水平的升高而降低，且與瘤胃ｐＨ和ＮＨ３⁃Ｎ含量呈顯著正相關，表明克里斯滕森菌科與ＶＦＡ和ＮＨ３⁃Ｎ的代謝相關，說明ＹＣ通過改善瘤胃微生物相對豐度，維持腸道結構和功能，進而調(diào)節(jié)機體的免疫力。

4結論