1.2 部分生長(zhǎng)性能和屠宰性能的測(cè)定 

體增重：在試驗(yàn)期的第1、30、60、90、120、150天上午對(duì)試驗(yàn)牛分別空腹稱重并記錄。眼肌面積測(cè)定：飼喂試驗(yàn)結(jié)束后，按照 《鮮、凍分割牛肉：GB/T 17238-2008》標(biāo)準(zhǔn)屠宰試驗(yàn)牛，將牛的二分胴體4℃排酸72h后，測(cè)定胴體12～13肋間背最長(zhǎng)肌的橫切面面積（先用硫酸紙繪出眼肌橫切面的輪廓，然后再由眼肌面積測(cè)量板測(cè)定）。大理石花紋等級(jí)評(píng)分：按照《牛肉等級(jí)規(guī)格：NYT 676-2010》對(duì)大理石花紋肉評(píng)分，評(píng)分等級(jí)由低到高依次為1到5分，由3人同時(shí)評(píng)分取中值。

1.3 試驗(yàn)樣品采集

飼喂試驗(yàn)結(jié)束后屠宰，立即從胴體第12～13肋骨間采集背最長(zhǎng)肌，經(jīng)無(wú)菌無(wú) RNA 酶處理水沖洗后，剪切成小塊（厚度約0.3cm）立即液氮冷凍保存，用于提取 RNA 后測(cè)定基因表達(dá)。

1.4 RNA 提取 

采用 UNlQ-10 柱式 Trizol 總 RNA 抽提試劑盒（生工生物，編號(hào)：B511321），按照產(chǎn)品說(shuō)明書提取牛背最長(zhǎng)肌總 RNA，用 SMA4000 微量分光光度計(jì)檢測(cè)總 RNA 的濃度，取3 μL 總 RNA 樣品用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢查其完整性。

1.5 基因表達(dá)的測(cè)定 

將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用Primer Premier 5.0 設(shè)計(jì) qRT-PCR 引物表2，并委托生工（上海）生物公司合成。用 β-actin 作為內(nèi)參基因。

2.2 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛眼肌面積的影響

眼肌面積測(cè)量結(jié)果如表4所示，與對(duì)照組（83.63±3.94）cm2相比，試驗(yàn)組牛的眼肌面積（89.73±4.11）cm2顯著增加了7.30%（P<0.01）。

2.3 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛大理石紋評(píng)分的影響

圖1為試驗(yàn)牛大理石紋對(duì)比圖，可以直觀看出試驗(yàn)組牛較對(duì)照組肌內(nèi)脂肪含量高，大理石花紋明顯。圖2是試驗(yàn)牛大理石紋等級(jí)評(píng)分分布，其中試驗(yàn)組5級(jí)牛有5頭，4級(jí)牛有7頭，分別占屠宰牛數(shù)的35.71%和50%, 均高于對(duì)照組的7.14%和35.71%；對(duì)照組中3級(jí)牛占比重最大，為對(duì)照組屠宰牛的50%，而試驗(yàn)組中3級(jí)牛僅占14.29%且無(wú)2級(jí)牛。試驗(yàn)組牛眼肌大理石花紋等級(jí)評(píng)分（4.21±0.69）極顯著（P<0.01）高于對(duì)照組肉牛（3.43±0.75）。

2.3 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛大理石紋評(píng)分的影響

圖1為試驗(yàn)牛大理石紋對(duì)比圖，可以直觀看出試驗(yàn)組牛較對(duì)照組肌內(nèi)脂肪含量高，大理石花紋明顯。圖2是試驗(yàn)牛大理石紋等級(jí)評(píng)分分布，其中試驗(yàn)組5級(jí)牛有5頭，4級(jí)牛有7頭，分別占屠宰牛數(shù)的35.71%和50%, 均高于對(duì)照組的7.14%和35.71%；對(duì)照組中3級(jí)牛占比重最大，為對(duì)照組屠宰牛的50%，而試驗(yàn)組中3級(jí)牛僅占14.29%且無(wú)2級(jí)牛。試驗(yàn)組牛眼肌大理石花紋等級(jí)評(píng)分（4.21±0.69）極顯著（P<0.01）高于對(duì)照組肉牛（3.43±0.75）。

2.4 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛TG/PPARα/PPARβ基因相對(duì)表達(dá)量的影響

由圖3可知，與對(duì)照組相比，添加生物飼料的肉牛眼肌肉組織中 TG 基因和PPARα基因的表達(dá)量分別提高了94.44%和55.93%，差異均顯著（P

3 討論與結(jié)論 

3.1 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛增重的影響 

本試驗(yàn)結(jié)果表明日糧中添加生物飼料，可使肉牛的平均總增重和日增重分別提高11.78%和12.63%。可見日糧中添加活性干酪乳桿菌和釀酒酵母生物飼料的飼料模式可以提高育肥牛的整體增重水平。這種育肥效果是有理可循的，生物飼料中微生物中含有大量的益生菌，在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生一些具特殊的小肽物質(zhì)，從而參與機(jī)體生理代謝、促進(jìn)氨基酸和礦物質(zhì)的吸收與富集，提高蛋白質(zhì)的合成效率，飼料中添加活性干酪乳桿菌和釀酒酵母使胃腸環(huán)境產(chǎn)生抑菌能力，從而促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育。此外，生物發(fā)酵飼料中的活性細(xì)胞進(jìn)入瘤胃而刺激胃內(nèi)容物的生成，使纖維分解菌和厭氧菌大量繁殖，從而提高了飼料的轉(zhuǎn)化率。這與麻名漢和曹蕾等報(bào)道研究結(jié)論相似。段鵬杰在秦川牛日糧中添加谷氨酸渣，發(fā)現(xiàn)其可以顯著提高育肥期公牛和育肥前、中期母牛的日增重，這與本研究對(duì)育肥期牛添加活性干酪乳桿菌和釀酒酵母的結(jié)果一致；高慧蘭等在西門塔爾牛日糧中添加0.5%的釀酒酵母培養(yǎng)物對(duì)肉牛增重效果顯著。吳道義等向2歲大小的雜交肉牛飼喂1%的酒糟生物飼料也可以顯著提高肉牛體重，結(jié)論與本試驗(yàn)一致。

3.2 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛眼肌面積的影響 

眼肌面積可作為評(píng)定牛屠宰后胴體品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，且與肉牛肉的產(chǎn)出也存在緊密的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果顯示試驗(yàn)組牛的眼肌面積較對(duì)照組大7.30%, 差異極顯著（P

3.3 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛大理石花紋評(píng)分的影響 

本試驗(yàn)經(jīng)過(guò)評(píng)定得出，試驗(yàn)組肉牛屠宰評(píng)定的大理石紋等級(jí)較空白對(duì)照組提高了20.29%，差異顯著（P<0.05）。耿春銀在利木贊牛飼糧中添加酵母益生菌飼料可以獲得更高的牛肉大理石紋（P

3.4 添加生物飼料對(duì)日本和牛×秦川牛F1育肥牛TG/PPARα/PPARβ基因相對(duì)表達(dá)量的影響 

肌內(nèi)脂肪（IMF）沉積與脂肪酸合成能力密切相關(guān)，當(dāng)脂肪酸合成加強(qiáng)就提高了 IMF 含量，進(jìn)而促進(jìn)大理石花紋的形成。TG 基因與處于生長(zhǎng)育肥期牛的大理石花紋性狀顯著相關(guān)；而 PPARs基因家族的主要作用是正向調(diào)控脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)，從而控制脂肪酸的合成。本試驗(yàn)選用28～29月齡、處在肌內(nèi)脂肪沉積期的肉牛，試驗(yàn)組牛背最長(zhǎng)肌 TG 基因較對(duì)照組有顯著（P<0.05）上調(diào)作用，李奎的研究表明復(fù)合酶制劑可以顯著提高青年安格斯牛 TG 基因的表達(dá)水平，說(shuō)明活性干酪乳桿菌和釀酒酵母等生物飼料可能促進(jìn)青年牛 TG 基因的表達(dá)，進(jìn)而提高牛的大理石花紋水平。苗海明研究不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)蒙古綿羊肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)基因 mRNA 表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)低能量水平促進(jìn) PPARs基因的表達(dá)，高蛋白水平抑制了 PPARs基因的表達(dá)；魏巧麗在肉牛飼料中添加 β-胡蘿卜素，可使 PPARs 表達(dá)量下降，使皮下脂肪和肌內(nèi)脂肪分化水平受到抑制。日糧中添加活性干酪乳桿菌和釀酒酵母飼料在未改變牛日糧的營(yíng)養(yǎng)水平的條件下，對(duì) PPARα基因（P

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)表明添飼活性干酪乳桿菌和釀酒酵母生物飼料對(duì)和秦F1育肥牛的體增重沒有顯著的提高作用，但在該飼料中的微生物中含有大量的益生菌，在動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生一些具特殊的小肽物質(zhì)，從而參與機(jī)體生理代謝、促進(jìn)氨基酸和礦物質(zhì)的吸收與富集，促進(jìn) PPARα（P<0.05）、TG（P<0.05）基因的表達(dá)，從而提高蛋白質(zhì)的合成效率，使得試驗(yàn)組牛的眼肌面積較對(duì)照組增加7.6%和大理石紋等級(jí)評(píng)分提高20.29%。Lund 等發(fā)現(xiàn)脂類物質(zhì)和蛋白質(zhì)的氧化是肉類和肉類產(chǎn)品質(zhì)量惡化的主要非微生物因素，通過(guò)在飼料中加入抗氧化劑或天然抗氧化劑，可以改善家禽和豬等非反芻動(dòng)物肉類的氧化穩(wěn)定性。因此猜測(cè)，活性干酪乳桿菌和釀酒酵母生物飼料是否有抗氧化劑成分從而改善了大理石紋，還需要更多的研究來(lái)驗(yàn)證。在基礎(chǔ)日糧中添加活性干酪乳桿菌和釀酒酵母生物飼料進(jìn)行育肥，可以顯著提高日本和牛×秦川牛雜交F1牛的背最長(zhǎng)肌組織中 TG、PPARα 基因的表達(dá)，并顯著提高眼肌面積和大理石花紋評(píng)分等級(jí)，可為肉牛育肥的飼料配方提供基礎(chǔ)資料。

生物發(fā)酵飼料的制作方法

生物發(fā)酵飼料不是什么高大上的東西，只要有專業(yè)的飼料發(fā)酵劑+原料就可以自己制作。所需的材料和設(shè)備都要求不高，具體做法是：

1.按照配方分別稱取原料（參考配方1：玉米50%、豆粕或菜粕50%；參考配方2：60%全價(jià)配合飼料、豆粕40%；參考配方3:100%的豬雞鴨全價(jià)飼料。配方中蛋白飼料越多效果越好。

2.選用含復(fù)合菌+復(fù)合酶制劑組合的酶菌結(jié)合飼料發(fā)酵劑，特別推薦選用“99多功能飼料發(fā)酵劑”這個(gè)發(fā)酵劑，500克/包，市場(chǎng)售價(jià)僅25元，發(fā)酵1-2噸飼料，使用量越大效果越好，菌種品種和數(shù)量多，且含豐富酶制劑分解飼料中的粗纖維效果好，且發(fā)酵完成的飼料香甜味和適口性更好。

3.將菌種溶于溫水中半小時(shí)以上，加入少量紅糖或糖蜜效果更好，然后均勻噴灑在發(fā)酵料中，邊拌邊灑，使發(fā)酵料的含水量達(dá)到手捏成團(tuán)、落地即散的程度，一般料含水量55%-60%比較好。

4.將拌好的發(fā)酵飼料裝于塑料桶或陶瓷缸中或水泥池內(nèi)，稍將料壓實(shí)后密封讓其自然發(fā)酵。一般氣溫在25℃以下時(shí)，發(fā)酵時(shí)間為7--10天，氣溫在25℃以上時(shí)，則為3--5天。

5.發(fā)酵后，pH值達(dá)到4--5以下，并有濃郁的酒香味，即為發(fā)酵成功。

發(fā)酵飼料制作現(xiàn)場(chǎng)

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2020年已全面禁抗，我們之前經(jīng)常在飼料中添加的抗生素進(jìn)行促生長(zhǎng)行為將是違法，否則面臨巨額罰單。如何既能夠促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)又能夠形成無(wú)抗養(yǎng)殖呢？其實(shí)中草藥在促進(jìn)畜禽養(yǎng)殖健康和生長(zhǎng)、改善肉蛋奶品質(zhì)大有可為，特別是將中草藥發(fā)酵后效果提升4-28倍等好處，這個(gè)實(shí)施方案比你想象中效果更好，運(yùn)用的沒有不被效果折服的，值得嘗試驗(yàn)證

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