摘要：

為了提高桑葉的營養價值，進行了發酵桑葉的工藝優化研究。以發酵桑葉粗蛋白質和單寧含量為指標，以桑葉與麩皮質量比、菌種組合、接種量和發酵時間為影響因素，進行L9(34)正交試驗，以確定最佳發酵條件。根據正交試驗結果進行驗證試驗和對比試驗。結果表明:1)正交試驗優化組合為，桑葉與麩皮質量比為9∶1，菌種組合為酒窖片球菌+地衣芽孢桿菌，接種量為2%，發酵時間為4d。2)驗證試驗表明，優化組合發酵桑葉測得粗蛋白質含量為26.18%，單寧含量為4.73g/kg，均優于正交試驗表中最優值。3)對比試驗表明，與未發酵桑葉相比，發酵桑葉粗蛋白質、粗脂肪、粗灰分、磷含量顯著提高(P＜0.05)，單寧、中性洗滌纖維、碳水化合物含量和PH顯著降低(P＜0.05)。與未發酵桑葉相比，發酵桑葉精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、總非必需氨基酸、總氨基酸含量顯著降低(P＜0.05)，而丙氨酸含量、總必需氨基酸/總氨基酸、總必需氨基酸/總非必需氨基酸顯著提高(P＜0.05)。發酵桑葉的半胱氨酸+蛋氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、酪氨酸+苯丙氨酸組成均顯著高于未發酵桑葉(P＜0.05)。由此可見，發酵桑葉的最佳條件是:桑葉與麩皮質量比為9:1，菌種組合為酒窖片球菌+地衣芽孢桿菌，接種量為2%，發酵時間為4d。發酵提高了桑葉的營養價值。

引言：

單寧是復雜的水溶性多酚化合物，存在于許多植物中，并可存在于樹皮、樹葉、樹干、果實和根中。單寧能夠絡合蛋白質、氨基酸、大分子物質，對消化酶產生拮抗作用，阻礙營養物質的吸收，降低動物的消化率；并因其苦澀的味道減少動物的采食量，從而降低植物飼料的營養價值。桑葉資源豐富，富含粗蛋白質(CP)、氨基酸、維生素、礦物質，是一種較好的非常規飼料資源。但桑葉單寧含量較高，限制了其在畜牧業的應用。因此，有效降解單寧對提升桑葉的應用價值具有重要意義。物理加工技術可以有效地降解單寧，如高溫、浸泡、煮沸、高壓、擠壓蒸煮等。盡管上述技術可以降解一些單寧，但也可能降低桑葉營養成分。另外，上述技術耗能成本較高，不利于可持續發展。因此，需要一種更合適的、高效降解桑葉單寧的技術。發酵是利用微生物將植物莖葉成分轉化為微生物蛋白、活性小肽、活性物質的技術，能降解抗營養因子，提高飼料原料的營養價值。黑曲霉、地衣芽孢桿菌、酵母、乳酸菌可以高效地將高分子單寧降解為小分子物質。柔毛鐮孢菌和球孢白僵菌等絲狀真菌發酵顯著減少了橄欖餅單寧含量。黑曲霉、產朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌發酵降低了辣木葉41%單寧含量，提高了44%CP含量。羅伊氏乳桿菌、乳酸片球菌、枯草芽孢桿菌發酵降低了朱纓花葉單寧含量。這些文獻為發酵降解桑葉單寧提供了思路。但是，關于桑葉發酵工藝的研究很少，通過發酵技術降解桑葉單寧的研究更少，尚不清楚發酵條件如何影響桑葉單寧的降解。因此，本研究通過正交試驗優化了提高桑葉CP含量同時降低單寧含量的發酵條件，研究了桑葉發酵基質組成、菌種組合、接種量及發酵時間對單寧降解的影響，并且探討了發酵對桑葉營養成分的影響，以期為桑葉的應用提供參考。

試驗設計：

將鮮桑葉切短(1～2cm)，按照一定比例添加麩皮混合均勻，按照所需菌種組合和接種量添加菌種并攪拌均勻，發酵基質未滅菌，基質pH自然狀態(不調整pH)，每個呼吸袋裝入200g發酵基質，密封發酵。在空調房內進行發酵，發酵溫度為(25±1)℃。

結果：

1.正交試驗極差分析

由表2可知，通過直觀分析方法比較表中極差大小，對CP含量影響因素大小排序為:桑葉與麩皮質量比(A)、菌種組合(B)、接種量(C)、發酵時間(D)。根據Ki值的大小判斷最優水平，得到各因素對CP含量的最優組合為A1B2C2D2。同理，對單寧含量影響因素大小排序為:菌種組合(B)、發酵時間(D)、桑葉與麩皮質量比(A)、接種量(C)，得到各因素對單寧含量的最優組合為A1B2C2D1。綜合上述分析，桑葉發酵最優方案為A1B2C2D1或A1B2C2D2，即桑葉與麩皮質量比為9∶1，菌種組合為酒窖片球菌+地衣芽孢桿菌，接種量為2%，發酵時間為4或6d。

2.正交試驗方差分析

由表3和表4可知，CP的校正模型P值為0.030＜0.05，說明校正模型對試驗結果有顯著影響，正交試驗結果具有可信度。桑葉與麩皮質量比和菌種組合顯著影響發酵桑葉CP含量，說明二者是影響發酵桑葉CP含量的主要因素。根據F值得到，對CP含量影響因素大小排序為:桑葉與麩皮質量比、菌種組合、接種量、發酵時間。對桑葉與麩皮質量比(A)分析，A1的CP含量顯著高于A3(P＜0.05)，A2的CP含量與A1、A3差異均不顯著(P＞0.05)，因此選擇A1。同理，菌種組合(B)選擇B2。桑葉與麩皮質量比(A)和菌種組合(B)對CP含量的最優組合為A1B2。同理，菌種組合和發酵時間是影響單寧含量的主要因素。菌種組合(B)和發酵時間(D)對單寧含量的最優組合為B2D1。綜合CP和單寧含量的最優組合，得到桑葉發酵最優組合為A1B2CiD1。

3.對比試驗

3.1營養成分

發酵桑葉顏色黃綠，有桑葉清香，味道酸甜。由表5可知，發酵桑葉CP和EE含量分別比未發酵桑葉提高了16.82%和30.57%(P＜0.05)。發酵桑葉粗灰分和磷含量顯著高于未發酵桑葉(P＜0.05)。發酵桑葉單寧、NDF、碳水化合物含量分別比未發酵桑葉降低了56.40%、16.78%、7.29%(P＜0.05)。發酵桑葉pH顯著低于未發酵桑葉(P＜0.05)。發酵桑葉與未發酵桑葉之間DM、CF、ADF、鈣含量差異不顯著(P＞0.05)。

3.2氨基酸含量

由表6可知，與未發酵桑葉相比，發酵桑葉精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、總非必需氨基酸、總氨基酸含量顯著降低(P＜0.05)，而丙氨酸含量、總必需氨基酸/總氨基酸(TEAA/TAA)、總必需氨基酸/總非必需氨基酸(TEAA/TNEAA)顯著提高(P＜0.05)。

3.3必需氨基酸組成

由表7可知，發酵桑葉的半胱氨酸+蛋氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、酪氨酸+苯丙氨酸組成均顯著高于未發酵桑葉(P＜0.05)。與未發酵桑葉相比，發酵桑葉纈氨酸組成有提高的趨勢(0.05≤P＜0.10)。未發酵桑葉和發酵桑葉的賴氨酸和亮氨酸組成高于雞蛋蛋白和聯合國糧農組織(FAO)模式，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、酪氨酸+苯丙氨酸和總必需氨基酸組成高于FAO模式，稍低于雞蛋蛋白模式，半胱氨酸+蛋氨酸組成低于雞蛋蛋白和FAO模式。由此可見，未發酵桑葉和發酵桑葉的必需氨基酸組成較為均衡，發酵桑葉必需氨基酸組成優于未發酵桑葉。

結論:

發酵桑葉的最佳條件是:桑葉與麩皮質量比為9∶1，菌種組合為酒窖片球菌+地衣芽孢桿菌，接種量為2%，發酵時間為4d。發酵提高了桑葉CP、EE、粗灰分、磷含量，降低單寧、NDF、碳水化合物、非必需氨基酸含量和pH。

本產品是一種以高濃度乳酸菌和酵母菌等組合酶菌結合的復合專業飼料發酵劑產品，可以發酵我們常見的大部分飼料原料、農家飼料、農產品與食品加工下腳料，制作活性EM菌液與制作青貯飼料，具有發酵、除霉、降解纖維、提高發酵飼料營養與適口性且能夠長時間保存等功能，具有操作簡單成功率高、成本低廉等特點。

本產品符合飼料衛生標準

【生產許可證號】桂飼添（2021）H01001

【產品執行標準】Q/NNWR 02-2021（飼用復合微生物添加劑Ⅰ）

【適用對象】畜禽、水產、環保

【原料組成】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌等，復合酶制劑與載體等。

【產品成分分析保證值】酵母菌、芽孢桿菌、乳酸菌等合計≥100億cfu/g，水分＜9.0%。

凈重：200 克/袋。

本產品是在活力99生酵劑的基礎上的升級產品，升級了増香增甜等功能效果。

鑒別本產品真假與效果的簡單方法：500毫升左右的礦泉水瓶子中放入約50克大米+300毫升35℃左右的溫水，加入本產品5克，幾個小時就會產生大量香醇氣體，72小時內大米基本溶解為乳狀。做試驗時請切記要注意礦泉水瓶炸開的安全。

產品使用說明書

（一）制作加強型活性EM菌液

在非金屬容器中將本品1包（200克）與1公斤紅糖（也可以用5公斤大米或玉米等含淀粉類的飼料代替）放入約50公斤溫水中，簡單密封48小時后就變成了加強型活性EM菌液（每毫升活菌在100億左右）。其使用方法如下：

1.在畜禽上的使用方法：根據不同動物與飼養周期按其飼料重量的0.1%-0.5%拌入飼料或飲水中后飼喂或飲用。

2.養殖場緊急除臭生物消毒：取加強型活性EM菌液兌水30倍清水，對產生臭味與異味的養殖區域、糞污水道、糞堆、污水池進行噴灑，以噴灑表面濕潤為準，接待參觀前1-3小時補噴一次效果更好。

3.制作青貯飼料：每噸青貯飼料中加入10公斤加強型活性EM菌液，簡單噴灑在料上壓實密封發酵15天以上。

4.養殖水產上的使用：每畝使用5公斤加強型活性EM菌液進行噴灑，晴天進行噴灑后注意增氧。

（二）制作各種發酵飼料

本品能夠發酵木薯渣、豆渣、米粉面條加工下腳料、剩菜剩飯、米糠、統糠、菌糠、酒糟、果渣果皮、青黃秸稈、牧草、紅薯藤、輕度霉變飼料等各種廉價飼料（下腳料）、各種飼料原料與全價飼料等，每500公斤待發酵原料加入本品1-2包（或50公斤上述加強型活性EM菌液）、20公斤以上的玉米粉或其它含淀粉類的飼料原料、1公斤食鹽（含有足夠食鹽的原料就不添加），含水量調節到約60%，壓實密封發酵2-7天左右有濃郁香味時即可使用。發酵后飼料的適口性、營養、消化率較未發酵前有明顯提升。發酵后的飼料根據不同動物與不同飼養周期按照10%-50%與該動物其它全價飼料混合后飼喂（先少量飼喂適應后逐漸增加的原則），不可以單獨飼喂或全部飼喂發酵飼料。

（三）發酵水產動物飼料成高濃度乳酸菌保健品

①部分發酵飼料運用：100公斤水產飼料、50公斤清水、本品1包密封發酵7天以上變成高濃度乳酸菌發酵飼料，以10%比例與水產動物飼料混合后飼喂，或者發酵飼料單獨飼喂；②全部發酵飼料飼喂：也叫輕度發酵飼料技術，300公斤水產全價飼料、本品1包、水120公斤混合發酵24小時全部飼喂，這種預消化結合大量乳酸菌飼喂能夠顯著改善水產動物腸道健康、水質改善等優點。

（四）發酵部分禽糞做飼料

發酵雞糞（鴿子糞、兔糞等）作豬、魚等動物飼料，本品2包、100公斤玉米粉其它含淀粉類的飼料原料、500公斤雞糞，加入適量麥麩或米糠調節含水量約為55%-60%，覆蓋薄膜進行發酵，一周左右有濃郁香味時即可使用，可代替飼料20%左右，用于喂豬或魚類等。

（五）發酵菜粕、棉粕、花生餅、茶枯脫毒

原料1000公斤，玉米面其它含淀粉類的飼料原料100公斤，食鹽2公斤，含水量調節到55%左右，本品2包，簡單地攪拌均勻，密封發酵15天以上成為高濃度乳酸菌小肽豐富的生物蛋白飼料，喂前攤開透氣10分鐘再作為蛋白質原料使用于自配飼料中，可以等蛋白代替豆粕和玉米粉如：17%的發酵菜粕=10%的豆粕+7%的玉米粉，降低成本提高使用效果。

（六）中草藥及中藥渣發酵方法

1.固態中草藥發酵技術：將50公斤中草藥粉碎，越細越好放入40公斤的35℃左右的溫水中，加入玉米粉與豆粕各5公斤、本品1-2包、食鹽100克，放入塑料容器內壓實密封發酵7天以上后使用，密封可以保存一年以上，按照飼料比例的1%以上添加到飼料或飲水中使用。

2.液態中草藥發酵技術：1公斤中草藥+1包本品+1公斤紅糖+20公斤清水混合在非金屬容器中簡單密封發酵72小時以上后使用。每噸飼料中添加10公斤或每噸飲水中添加5公斤。

（七）直接拌料或飲水、制粒飼喂、制作水料

根據不同動物在每噸飼料添加本品2-4包，直接拌料或每包加入1.5-2噸飲水中使用；本產品采用微生物多層包被技術，在每噸3包本品混合飼料中直接制粒，90℃下5分鐘不會影響效果；動物采用水料水料（粥料）的制作：本品1-2包、500公斤全價飼料、1000公斤清水混合后發酵6小時以上后飼喂（預消化的輕度發酵模式），24小時內飼喂完。

（八）注意事項

1.發酵飼料時，請勿加入濃度較高抑菌劑的脫霉劑或抗生素（如土霉素），或發酵原料中帶有較強殺菌物質可能導致發酵不成功；原料霉變稍重、發現發酵速度變慢或者溫度偏低，可以增加2-3倍的使用量即可解決。

2.飼料中正常添加的抗生素不會造成對本品效果的影響，但在大劑量對動物治療期間要會影響效果但無副作用（可以間隔4小時使用）。運用本品后的健康動物可以減少或停用抗生素的使用。

3.特別提醒：如果是第一次制作發酵飼料、需要發酵的原料霉變或變質較重、發酵環境溫度較低（低于15℃）、粗纖維較高、需要加快發酵速度或者需要制作出更加香醇高品質的生物發酵飼料出來等情況，請按照本產品說明書使用量增加2-3倍的使用量即可。

【包裝規格】200克/包，80包/箱。規模養殖場可以提供25公斤裝或者進行產品定制。

【質保與儲存】12個月，常溫下于通風、陰涼、干燥處存放。

【生產企業】南寧微瑞生物科技有限公司（高新區科園大道58號）

【客服電話】400-030-9099

廣西助農畜牧科技有限公司有7個專業現代生態養殖技術實戰型團隊，為全國養殖場進行非洲豬瘟防控技術、現代循環生態養殖場的規劃、設計、建設、整改等服務；養殖場環保問題低成本解決方案（養殖場惡臭、氨氣，蒼蠅、污水、糞污資源化、病死動物無害化處理）與專業配套產品。幫助政府部門完成現代生態養殖、糞污資源化、病死動物無害化處理、糧改飼、秸稈綜合利用、牧草產業等達標工作、培訓工作（免費且有專業資料等），針對您當地制定專業方案，做出示范樣板后確定效果再進行推廣。

廣西助農畜牧科技有限公司提供全方位支撐

廣西助農公司有著20余年的生物發酵飼料經驗，能夠針對你的養殖場做出最適合的模式，我們的發酵技術不僅設施投資簡單（僅需塑料袋或塑料容器等即可），且發酵成功率很高。最關鍵是制作出來的發酵飼料品質比一般更好（得益于先進的酶菌結合發酵劑與經驗總結），能夠為你生產出低成本、養殖環保無抗優質的動物產品出來，大量成功案例可以驗證。提供上門服務（快速解決家禽養殖上的疾病、環保、肉品質等問題）。

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相關鏈接——農業農村部鼓勵企業和研發機構加快生物飼料、酶制劑、益生菌、植物提取物等抗生素替代產品開發，推動全行業抗生素減量替代，確保畜禽產品質量安全