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乳酸菌對固態飼料發酵效果的影響

2021-06-01 09:57:58      點擊:

摘要:研究在固態飼料發酵過程中,添加乳酸菌對飼料的水分、氣味、松散度,以及酵母和黑曲霉生長的影響。在發酵24h時添加乳酸菌,比在初始發酵時添加效果要好,飼料的氣味、松散度、酵母數、蛋白含量均較高。


生物飼料是指通過發酵工程、酶工程、蛋白質工程等生物工程技術開發的產品,生物飼料包括發酵飼料,其中發酵飼料是通過微生物自身的代謝活動,將植物性、動物性和礦物性物質中的抗營養因子分解或轉化,產生更能被畜禽采食、消化、吸收且無毒害作用的飼料。發酵飼料具有眾多優點,其中最突出的優點是為動物提供額外益生菌,從而達到調節腸道菌群,維持腸道健康,預防疾病的目的。

固態發酵飼料常選用的益生菌菌種有乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌和小型絲狀真菌等。國內開發和利用的益生菌主要是乳酸菌類。乳酸菌是一大類的革蘭氏陽性細菌,無芽袍,桿菌或球菌,乳酸菌可以增強動物體免疫力。降低發酵飼料的酸度,增加飼料適口性。

固態發酵飼料過程中,乳酸菌急劇增殖,乳酸大量產生,迅速降低體系pH,抑制其他細菌的活動,減少貯藏過程中干物質和營養物質的損失。乳酸菌固態發酵飼料產酸條件非常重要,直接影響發酵周期與發酵飼料的品質。

飼料經乳酸菌發酵后,淀粉和蛋白質等大分子物質轉化成葡萄糖、氨基酸和肽類等小分子物質,縮短了消化、轉化反應鏈,使各種有效成分能迅速、高效地被吸收利用,在采食量增加的同時,飼料轉化效率也得到提高。

大量研宄表明,飼用發酵飼料可以顯著提高畜禽動物的生產性能、養分表觀消化率與免疫性能。乳酸菌固態發酵飼料,富含乳酸菌、有機酸、天然抑菌物質與酸香風味物質,體外發酵無污染、低成本、低風險,體內應用因發酵預消化而有利于動物采食消化吸收,因益生菌的定植與有機酸的調節而抑制有害菌,提高機體免疫性能,是目前研宄較多的一種替代抗生素的飼養策略。隨著動物飼養與飼料生產的逐漸規?;幏痘?,乳酸菌固態發酵飼料一定會有更大更廣闊的應用潛力。

本文以木薯酒糟為原料,在固態飼料發酵過程中,添加乳酸菌對飼料的水分、氣味、松散度,以及酵母和黑曲霉生長的影響。

1 材料和設備

1.1 材料

木薯酒糟(廣西某生物質能源有限公司提供)、尿素、豆粕(購買自市場)。

1.2 設備儀器

250mL三角瓶3個;

500mL三角瓶5個;

1000mL三角瓶5個;

天平;搖床;恒溫培養箱;滅菌鍋;烘箱;電爐;凱氏定氮儀;超凈工作臺;水分測定儀等。

2 實驗方法

2.1 菌種的培養

2.1.1 黑曲霉F1培養方法

(1)菌種活化:配制麩皮培養基,250mL三角瓶中裝50g,滅菌冷卻至至25 ℃,接斜面菌種3~4環,33℃培養至黑曲霉孢子數1億個/g(約培養4~5d)。

(2)一級放大培養:配制麩皮培養基1瓶,0.5L三角瓶中裝100g,滅菌冷卻至25℃,接種黑曲霉活化孢子1%,35℃培養至黑曲霉孢子數1億個/g(約培養4d)。

(3)二級放大培養:取廢醪液200g,添加1%麩皮,裝至500mL三角瓶中,接一級菌種1%,35℃,搖床180rpm培養3d,獲得黑曲霉菌液(纖維素酶活達到120U/mL)。

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2.1.2 酵母Z4培養方法

(1)一級放大培養:配制YPD液體培養基,500mL三角瓶裝200g,滅菌冷卻至室溫后,接活化菌種3~4環,35℃,160rpm,搖床培養至酵母數2億個/mL。

(2)二級放大培養:取培養液200g,添加20%糖化醪和0.3%尿素(按糖化醪量算)后,裝至500mL三角瓶中,接一級菌種5%,35℃,160rpm,搖床培養至酵母數>1億個/mL。

(3)一代酵母泥菌種:取清液1L,分裝2瓶,每個1000mL三角瓶裝500g,接二級菌種5%,35℃,160rpm,搖床培養1d。發酵結束,將菌液放到1L量筒中靜置分層3h,倒掉3/4上清液,獲得一代酵母泥菌種250g,酵母數>1億/mL。

(4)二代酵母泥菌種:取清液1L,分裝2瓶,每個1000mL三角瓶裝500g,接種一代酵母泥菌種5%,35℃,160rpm,搖床培養1d。發酵結束,將菌液放到1L量筒中靜置分層3h,倒掉3/4上清液,獲得二代酵母泥菌種250g,酵母數>1億/mL。

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2.1.3 乳酸菌的培養方法

(1)配置MRS液體培養基1瓶,500mL三角瓶中裝200g。

(2)接10%新鮮酸奶至MRS液體培養基中,35℃,靜置培養1d。

(3)培養結束,采用MRS固體培養基涂板法,在35℃,培養3d,計數菌落數。


2.2 固體飼料發酵實驗


按照不同的乳酸菌添加方式分別制備4種固體飼料進行同步發酵實驗,在發酵過程中觀察飼料的變化情況,進行比較,發酵結束后檢測飼料的水分、蛋白含量。發酵工藝如圖3

1622514178874836.png

2.2.1 飼料樣品的發酵(1#樣品)

取新鮮濕糟(水分約70%)500g放入發酵塑料盒中,添加8%豆粕,1.8%尿素,磷酸二氫鉀0.05%,1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液,添加1%的乳酸菌菌液,攪拌均勻,35℃,培養2d(輔料添加比例及接種量按濕糟的絕干重計)。


2.2.2 飼料樣品的發酵(2#樣品)


取新鮮濕糟(水分約70%)500g放入發酵塑料盒中,添加8%豆粕,1.8%尿素,磷酸二氫鉀0.05%,添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液,攪拌均勻,35℃,培養24h。發酵24h后,添加1%的乳酸菌菌液,攪拌均勻,裝入密封塑料袋,35℃,厭氧發酵1d(輔料添加比例及接種量按濕糟的絕干重計)。


2.2.3 飼料樣品的發酵(3#樣品)


取新鮮濕糟(水分約70%)500g放入發酵塑料盒中,添加8%豆粕,1.8%尿素,磷酸二氫鉀0.05%,添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液,攪拌均勻,35℃,培養24h。發酵24h后,添加1%的乳酸菌菌液,攪拌均勻,35℃,好氧發酵1d(輔料的添加比例及接種量按濕糟的絕干重計)。


2.2.4 飼料樣品的發酵(4#樣品)


取新鮮濕糟(水分約70%)500g放入發酵塑料盒中,添加8%豆粕,1.8%尿素,磷酸二氫鉀0.05%,添加1%的黑曲霉F1菌液和5%的二代酵母泥菌液,攪拌均勻,35℃,發酵培養48h(輔料的添加比例及接種量按濕糟的絕干重計)。發酵24h、48h時,攪拌物料,并觀察黑曲霉、酵母生長情況,及物料的水分、氣味變化。發酵結束,檢測粗蛋白、乳酸菌菌數、pH。

2.3 檢測方法


水分:快速水分測定儀法。

蛋白質:采用凱氏定氮法(參照國標GBT6432-1994)。


2.4 檢測結果及分析


四種樣品的發酵情況見表1。

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為數據進行結果分析。整理如表1。

1622514263552743.png

實驗結果表明:

(1)發酵初始時添加1%的乳酸菌,并進行好氧發酵(1#樣品):

發酵過程,木薯渣蛋白 16.54%,物料水分維持在 56% 左右,沒有發現霉菌菌絲大量生長,物料pH4.5-5.5;發酵24h,有淡淡的霉味,酵母數達10億個/g;發酵48h,物料結塊,沒有乳酸味,乳酸菌未檢出,酵母數達16億個/g,產品蛋白24.79%,較原來提高了49.88%。

(2)發酵24h后添加1%的乳酸菌,并進行厭氧發酵(2#樣品):

發酵過程,木薯渣蛋白16.54%,物料水分維持在56%左右,沒有發現霉菌菌絲大量生長,物料pH4.5-5.5;發酵24h,有淡淡的霉味,酵母數達14億個/g;發酵48h,物料松散且有明顯乳酸味,乳酸菌數6億個/g,酵母數達16億個/g,產品蛋白25.81%,較原來提高了56.04%。

(3)發酵24h后添加1%的乳酸菌,并進行好氧發酵(3#樣品):

發酵過程,木薯渣蛋白16.54%,物料水分維持在56%左右,沒有發現霉菌菌絲大量生長,物料pH4.5-5.5;發酵24h,有淡淡的霉味,酵母數達14億個/g;發酵48h,物料輕微結塊,有輕微乳酸味,乳酸菌數3億個/g,酵母數10億個/g,產品蛋白27.68%,較原來提高了67.35%。

(4)發酵過程中沒有添加乳酸菌,并進行好氧發酵(4#樣品):

發酵過程,木薯渣蛋白 16.54%,物料水分維持在 56% 左右,沒有發現霉菌菌絲大量生長,物料pH4.5-5.5;發酵24h,有淡淡的霉味,酵母數達14億個/g;發酵48h,物料結塊,沒有乳酸味,乳酸菌未檢出,酵母數5.8億個/g,產品蛋白24.6%,較原來提高了48.73%。

將表1所述實驗數據畫成折線圖以便于分析,得圖1。

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由圖1可知,物料粘度隨淀粉比例的增加而增大,相同的溫度和剪切速率下,淀粉比例越大物料粘度越大,且淀粉比例大于15%時,粘度隨淀粉比例變化速度加快。

3 結論


綜上所述,發酵過程,木薯渣蛋白16.54%,物料水分維持在56%左右,沒有發現霉菌菌絲大量生長,物料pH4.5-5.5;發酵結束,添加乳酸菌的樣品蛋白提高率為 50% 以上,較空白樣(48.73%)高,酵母數都高于空白樣,且發酵24h添加乳酸菌的樣品,物料較疏松,乳酸菌數較多,有乳酸清香味,霉味較淡。

4 結論


通過本實驗分析,餐廚垃圾經初步固液分離后,淀粉比例對固液分離剩余物的粘度起到很大作用,比例大于15%時現象尤為顯著。所以,在餐廚垃圾固液分離剩余物的處理中,可通過適當降低漿料中淀粉比例以降低其粘度,提高固液分離效率及剩余物的處理效率。

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