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1.1 FML 的制備

FML 由路德生物環(huán)保技術(shù)( 古藺) 有限公司提供。其生產(chǎn)工藝如下:以茅臺(tái)酒糟為培養(yǎng)基，接種高活性酵母菌種，采用三段式純固態(tài)發(fā)酵工藝制備FML。第1 階段優(yōu)化培養(yǎng)條件促進(jìn)酵母菌增殖;第2 階段在厭氧條件下保證酵母的充分代謝，分泌代謝產(chǎn)物;第3 階段在高溫高濕的條件下促使酵母細(xì)胞破壁自溶水解。經(jīng)測(cè)定，F(xiàn)ML 中以干物質(zhì)( 含量為92.97%) 為基礎(chǔ)的養(yǎng)分水平如下:粗灰分9.28%、粗蛋白質(zhì)23.96%、粗脂肪5.39%、粗纖維17.67%、酸性洗滌纖維38.0%、中性洗滌纖維47.28%、鈣0.53%、磷0.55%和總能18.29 MJ /kg。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組與飼養(yǎng)管理

動(dòng)物試驗(yàn)在中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所永安動(dòng)物試驗(yàn)基地開展。試驗(yàn)選取平均體重為(39.95±2.15) kg 的健康杜×長(zhǎng)×大三元雜交去勢(shì)公豬48 頭，根據(jù)體重隨機(jī)分為4 組，每組12 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1 頭豬，飼養(yǎng)于HHIS－02 型全自動(dòng)飼喂系統(tǒng)(河南某公司) 中。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組用FML 分別替代5%、10%和15%的基礎(chǔ)飼糧。基礎(chǔ)飼糧的營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)符合NＲC(2012) 推薦量，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)過程中，全自動(dòng)飼喂系統(tǒng)實(shí)時(shí)記錄每頭試豬的日采食量和日增重等數(shù)據(jù)。飼喂、飲水、采光和免疫等飼養(yǎng)管理按養(yǎng)殖場(chǎng)規(guī)范操作。

1.3 樣品采集與處理

分別于試豬平均體重達(dá)60、75 和110 kg 時(shí)，每組隨機(jī)選取8 頭試豬，清晨空腹稱重，前腔靜脈采血10 mL，肝素抗凝，3 000 r /min 離心10 min，分離血漿，分裝于1.5 mL EP 管中，－20 ℃保存，用于血漿生化參數(shù)和抗氧化指標(biāo)的測(cè)定。

1.4 血漿生化參數(shù)和抗氧化指標(biāo)測(cè)定

血漿樣品于4 ℃解凍后，按試劑盒( Beckman公司) 說明，采用CX4 型全自動(dòng)生化分析儀( 美國(guó)Beckman 公司) 測(cè)定血漿中總蛋白( TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮( UN)、葡萄糖( GLU)、甘油三酯(TG)、總膽固醇( CHO)、高密度脂蛋白－膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白－膽固醇( LDL-C) 含量以及乳酸脫氫酶( LDH)、α－淀粉酶( α-AMY)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST) 和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT) 活性。按照試劑盒( 南京建成生物工程研究所) 說明，檢測(cè)血漿中過氧化氫酶( CAT)、超氧化物歧化酶( SOD ) 和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px ) 活性以及谷胱甘肽( GSH) 和丙二醛(MDA) 的含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，數(shù)據(jù)用Excel 2010 初步整理后，利用SPSS 22.0 進(jìn)行單因素方差分析( one-way ANOVA) ，并用Duncan 氏法對(duì)各組數(shù)據(jù)平均值進(jìn)行多重比較。P＜0.05 表示差異顯著，0.05≤P＜0.10 表示有變化趨勢(shì)。

2.1 FML 對(duì)育肥豬血漿生化參數(shù)的影響

由表2 可知，在體重60 kg 時(shí)，與對(duì)照組相比，5%替代組血漿LDL-C 含量和α-AMY 活性顯著升高( P ＜ 0.05) ，血漿ALT 活性顯著降低( P ＜0.05) ; 10% 替代組血漿α-AMY 活性顯著升高(P＜0.05) ，血漿GLU 含量和ALT 活性顯著降低(P＜ 0.05) ，血漿HDL-C 含量呈降低趨勢(shì)( P =0.059) ;15%替代組血漿TG 含量顯著增加( P ＜0.05)。與5% 替代組相比，10% 替代組血漿LDL-C含量顯著降低(P＜0.05) ，血漿CHO 含量呈降低趨勢(shì)(P = 0.056) ;15%替代組血漿LDL-C 含量呈降低趨勢(shì)(P = 0.066) ，血漿α-AMY 活性顯著降低(P＜0.05)。與10%替代組相比，15%替代組血漿GLU 含量顯著增加( P＜0.05) ，血漿α-AMY活性顯著降低(P＜0.05)。在體重75 kg 時(shí)，與對(duì)照組相比，5%替代組血漿LDL-C 含量顯著增加( P ＜ 0.05) ，血漿HDL-C含量顯著降低(P＜0.05) ;10%替代組血漿LDL-C含量顯著增加( P＜0.05) ，血漿AST 和LDH 活性顯著降低( P ＜ 0.05 ) ; 15% 替代組血漿UN、HDL-C、GLU 含量以及α-AMY、AST 和LDH 活性顯著降低( P＜ 0.05) ，血漿ALB 含量呈增加趨勢(shì)(P = 0.077)。與5%替代組相比，10%替代組血漿UN 含量呈降低趨勢(shì)( P = 0.064) ，血漿AST 和LDH 活性顯著降低( P ＜ 0.05) ;15%替代組血漿UN、LDL-C 含量以及α-AMY、AST 和LDH 活性顯著降低(P ＜ 0.05) ，血漿CHO 含量呈降低趨勢(shì)(P = 0.052)。與10%替代組相比，15%替代組血漿UN 和CHO 含量和α-AMY 活性顯著降低( P＜0.05)。

在體重110 kg 時(shí)，與對(duì)照組相比，5%替代組血漿UN 含量顯著降低(P＜0.05) ，血漿α-AMY 活性顯著升高( P ＜ 0.05) ，血漿ALT 活性顯著降低(P＜0.05) ;10%替代組血漿UN 含量和ALT 活性均顯著降低(P＜0.05) ，血漿AST 活性呈降低趨勢(shì)(P = 0.054) ，血漿TP 含量顯著增加( P ＜ 0.05) ;15%替代組血漿UN 含量以及AST 和ALT 活性顯著降低(P＜0.05) ，血漿TP 和ALB 含量顯著增加(P＜0.05)。與5%替代組相比，10%替代組血漿UN 含量和α-AMY 活性顯著降低(P＜0.05) ，血漿TG 含量呈降低趨勢(shì)(P = 0.057) ;15%替代組血漿UN 含量和α-AMY 活性顯著降低(P＜0.05) ，血漿GLU(P = 0.083) 含量以及AST(P = 0.080) 和ALT(P = 0.094) 活性呈降低趨勢(shì)，血漿TP 和ALB 含量顯著增加(P＜0.05)。與10%替代組相比，15%替代組血漿ALB 含量呈增加趨勢(shì)(P = 0.091)。

2.2 FML 對(duì)育肥豬血漿抗氧化指標(biāo)的影響

由表3 可知，在體重60 kg 時(shí)，與對(duì)照組和5%替代組相比，15%替代組血漿GSH-Px 活性顯著升高( P ＜ 0.05 ) ，血漿MDA 含量顯著降低( P ＜0.05) ;15%替代組血漿GSH 含量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。在體重75 kg 時(shí)，與對(duì)照組相比，各替代組血漿CAT 活性均顯著升高(P＜0.05) ;與對(duì)照組和5%替代組相比，10%替代組和15%替代組血漿GSH-Px 活性顯著升高( P＜ 0.05) ，15%替代組血漿SOD 活性顯著高于對(duì)照組( P＜0.05)。在體重110 kg 時(shí)，與對(duì)照組相比，15% 替代組血漿MDA 含量呈降低趨勢(shì)(P = 0.092)。

血漿TG、CHO、HDL-C 和LDL-C 含量是衡量機(jī)體脂質(zhì)代謝強(qiáng)弱的主要指標(biāo)。血漿TG 含量降低提示脂肪沉積能力減弱;血漿CHO 含量可反映機(jī)體對(duì)脂類的吸收代謝能力;LDL-C 將肝臟合成的CHO 轉(zhuǎn)運(yùn)到肝外組織，而HDL-C 則把CHO 運(yùn)回肝臟代謝轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，從而維持機(jī)體內(nèi)CHO 含量的穩(wěn)定。本試驗(yàn)中，用FML 部分替代基礎(chǔ)飼糧尤其是15%替代可顯著增加60 kg 育肥豬血漿TG 含量，5%替代可顯著增加60 kg 育肥豬血漿LDL-C 含量;5%和15%替代均可顯著降低75 kg 育肥豬血漿HDL-C 含量，5%和10%替代均可顯著增加75 kg 育肥豬血漿LDL-C 含量; 與10%替代相比，15%替代顯著降低了75 kg 育肥豬血漿CHO 含量。這提示FML 可改變育肥豬體脂代謝，且作用效果與添加量和添加階段有關(guān)。但上述血漿脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)的改變對(duì)動(dòng)物機(jī)體是不利的，肌肉中上述脂質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)如何發(fā)生變化尚需要進(jìn)一步研究。

血漿GLU 含量以及α-AMY 和LDH 活性是反映機(jī)體糖代謝的相關(guān)指標(biāo)。血漿GLU 含量受胰島素和胰高血糖素的調(diào)節(jié)，與動(dòng)物采食量、機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況和應(yīng)激水平也呈強(qiáng)相關(guān)。血漿α-AMY活性是反映機(jī)體消化吸收狀況的一個(gè)重要指標(biāo)，提高血漿α-AMY 活性可提高機(jī)體的消化吸收能力和抗病力。LDH 是與組織能量代謝密切相關(guān)的酶，動(dòng)物采食量降低、腸道或肌肉供能不足、細(xì)胞萎縮或凋亡，均可引起血漿LDH 活性的升高。本試驗(yàn)中，用FML 替代10%和15%基礎(chǔ)飼糧分別顯著降低了60 和75 kg 育肥豬血漿GLU 含量;5%和10%替代基礎(chǔ)飼糧顯著提高了60 kg 育肥豬血漿α-AMY 活性，15%替代顯著降低了75 kg 育肥豬血漿α-AMY 活性，5%替代顯著提高了110 kg 育肥豬血漿α-AMY 活性。此外，與5%替代相比，10%和15%替代顯著降低了110 kg育肥豬血漿α-AMY 活性;10%和15%替代顯著降低了75 kg 育肥豬血漿LDH 活性。這提示飼糧添加FML 能提高育肥豬的消化吸收能力，促進(jìn)機(jī)體的能量代謝。這可能是FML 中含有的各種活性成分促進(jìn)了育肥豬腸道益生菌的增殖，進(jìn)而改善了飼糧中的能量利用效率。而筆者前期研究用FML 替代部分基礎(chǔ)飼糧并不影響育肥豬的生長(zhǎng)性能，且添加5%的FML 可顯著增加平均日增重，顯著降低料重比( 數(shù)據(jù)未發(fā)表)。

AST 主要存在肝細(xì)胞胞漿和線粒體中，其活性的高低直接與肝細(xì)胞或線粒體的損傷程度相關(guān)。ALT 是機(jī)體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)氨酶，在氨基酸代謝以及蛋白質(zhì)、脂肪和糖的代謝轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮著重要作用。本試驗(yàn)中，用FML 部分替代基礎(chǔ)飼糧尤其是15%替代顯著降低了75 和110 kg 育肥豬血漿AST 活性，10%替代顯著降低了75 kg 育肥豬血漿AST 活性;5%和10%替代顯著降低了60 和100 kg 育肥豬血漿ALT 活性，15%替代顯著降低了75 和100 kg 育肥豬血漿ALT 活性，這與前述FML 可增加機(jī)體蛋白質(zhì)合成和改善機(jī)體能量代謝這一結(jié)果相符。這提示FML 替代部分基礎(chǔ)飼糧可對(duì)育肥豬肝功能產(chǎn)生有利影響，且其作用效果與替代量有關(guān)，這可能與發(fā)酵酒糟中含有的多種功能性多肽和未知生長(zhǎng)因子有關(guān)。

動(dòng)物機(jī)體中存在的清除氧自由基的酶系統(tǒng)主要包括SOD、GSH-Px 和CAT，其活性高低反映了機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱;GSH 可清除自由基、去除氫和脂質(zhì)過氧化物，防止生物分子的氧化;MDA 是自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其含量增加與自由基生成異常或機(jī)體抗氧化能力降低有關(guān)，因此其含量高低能直接反映細(xì)胞膜被氧化的程度。本試驗(yàn)中，用FML 替代15%基礎(chǔ)飼糧可顯著提高75 kg 育肥豬血漿CAT、SOD 和GSH-Px 活性，顯著提高60 kg 育肥豬血漿GSH-Px 活性和GSH 含量，并顯著降低60 kg 育肥豬血漿MDA 含量，表明FML 可增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能并減少氧化損傷。這可能與其中含有GSH、維生素B₂、維生素C、維生素E、硒和鋅等多種生物活性物質(zhì)有關(guān)。肌肉中的脂質(zhì)氧化會(huì)影響肉品質(zhì)，增強(qiáng)育肥豬機(jī)體抗氧化能力有助于減少肌肉中的脂質(zhì)氧化和細(xì)胞膜的損傷，這可能是飼糧添加FML 改善肉品質(zhì)的機(jī)制之一。